日外会誌. 93(4): 369-376, 1992
原著
低酸素－再酸素化における血管内皮細胞由来フリーラジカルの産生および血管内皮細胞障害
|
帝京大学 医学部第2外科（主任：沖永功太教授） 西田 勝則 (1991年2月5日受付) |
虚血・再潅流障害の発生におけるフリーラジカルの生成動態を検索する目的で， ヒト胴帯静脈より得た培養血管内皮細胞(EC)を低酸素ー再酸素化の環境化におき，同細胞からのフリーラジカル産生を経時的に観察するとともに，このときに生じた細胞障害について検討した． O2制御インキュベーターにより作製した低酸素条件下で2×105個のECを一定時間incubateし，その後ECを再酸素化状態においた．低酸素中および再酸素化後に上清中に放出されたスーパーオキサイドを，還元型チトクロームC量としてspectrophotometer(OD: 550nm)により経時的に測定した．その結果，再酸素化後3分で最大量のスーパーオキサイドの産生がみられた．チトクロームCの還元はスーパーオキサイドディスムターゼ(SOD)でほぼ完全に抑制され， アロプリノールでは約80％の抑制が得られた．さらに，スコポレチン法により測定したH2O2は，スーパーオキサイドの産生からやや遅れて観察され， 5分後に最大量に逹した． この反応はカタラーゼにより完全に抑制された．次に，低酸素ー再酸素化に伴うECの細胞障害について， Fura-2 release assayとトリパンブル一色素排除法により検討した． Fura-2 release assayでは，低酸素ー再酸素化により再酸素化後3分で51.0±0.9(SE)％の細胞障害を認めた．トリパンブル一色素排除試験でもほぽ同様の結果であった．この障害はアロプリノール投与により約50％の抑制が認められたが， SOD, カタラーゼでは有意な抑制が得られなかった．以上，低酸素ー再酸素化により， ECから速やかに大量のスーパーオキサイド，過酸化水素の放出が認められ，また，この反応にはキサンチンーキサンチンオキシダーゼ系が強く関与していることが示された．同時に有意なECの細胞障害が観察され，これらフリーラジカルの産生が，再潅流障害の発生に強く関与している可能性が示唆された．
キーワード
再灌流障害, MNMS, ヒト血管内皮細胞, フリーラジカル, 細胞障害
PDFを閲覧するためには Adobe Reader が必要です。