日外会誌. 93(4): 352-362, 1992
原著
脾臓および末梢血単核細胞より誘導したヒトlymphokine-activated killer (LAK)細胞におけるパーフォリンの発現に関する研究
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岡山大学 医学部第1外科(指導：折田薫三教授) 片岡 和彦 (1991年3月4日受付) |
パーフォリンは，免疫系のキラー細胞の細胞質顆粒内に存在する蛋白で，それらの重要な細胞障害因子と言われている．われわれは，ヒトパーフォリンのcDNAをクローニングすることに成功した．今回は， このcDNAを用いて， lymphokine-activatedkiller (LAK)細胞におけるパーフォリンの発現について検討した．
ヒト脾臓より単核細胞を分離し，recombinant interleukin-2を添加して培養し，LAK細胞を誘導した．バーフォリンmRNAの発現を経日的にみると，day0ではほとんど発現なく，day1に著明に発現の増強がみられ，day2以降は減弱した．これは，K562とDaudi細胞に対する細胞障害活性のピークに1日先行する形で相関していた．末梢血単核細胞由来のLAK細胞においても，パーフォリンの発現は，day0を1とすると， day1が3.6，day 2が1.8であった．抗パーフォリン抗体を用いた免疫染色により， blast化した大型の細胞の細胞質にパーフォリンが染色され，パーフォリンの誘導が蛋白レベルでも確認された． flow cytometryにより，パーフォリンを持つ細胞は， CD16+のNK細胞のほとんどと， CD8+Tリンパ球の一部であった．また，パーフォリンと同時に，tumor necrosis factor(TNF)-αβ，interferon (IFN)-γも誘導されていた．
以上より，脾臓および末梢血単核細胞由来のLAK細胞において，パーフォリンの誘導されていることが，mRNAレベルでも蛋白レベルでも確認された．mRNAレベルでは，day1にピークを示し，細胞障害活性に1日先行する形で相関していた．パーフォリンを有するサブセットは，NK細胞のほとんどと，CD8+Tリンパ球の一部であった．また，パーフォリンと同時にTNF，IFNも誘導されており，これらの物質が，相互に協調して作用し，総合的な細胞障害活性を示す可能性が示唆された．
キーワード
LAK細胞, パーフォリン, ノーザン・ブロッティング, flow cytometry
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